Con el conocimiento acumulado y los datos obtenidos en el primer proyecto, los investigadores pusieron en marcha un segundo proyecto denominado: “Evaluación de la terapia larval en el proceso de curación de heridas infectadas con Pseudomonas aeruginosa en un modelo animal”. El objetivo principal fue analizar la acción de las larvas de L. sericataen el tratamiento de heridas infectadas con bacterias y, también, comparar ese tratamiento con otro de carácter convencional utilizando antibióticos en un biomodelo animal.
Durante el desarrollo del trabajo tuvieron en cuenta la ley 84 de 1989 para el uso de animales de experimentación y las normas éticas para investigación sin riesgos, de acuerdo con la resolución No. 008430 de 1993 del Ministerio de Salud de Colombia. Con la autorización previa del Comité de Ética de la Facultad de Medicina de la Universidad del Rosario, tomaron 12 conejos, los cuales fueron divididos al azar en 3 grupos homogéneos: al primer grupo se le aplicó terapia larval, el segundo se trató con terapia de antibióticos (gentamicina), y el tercero fue establecido como control.
En marcha red de larvaterapia
Mientras hacen las pruebas con animales, los investigadores de la Universidad el Rosario con sus pares en la Universidad del Quindío, la Universidad Central del Valle del Cauca y la Universidad de La Salle, han dado los primeros pasos para constituir la Red Colombiana de Larvaterapia (Recla), con el objetivo inicial de difundir esta alternativa segura y económica para el tratamiento de heridas crónicas.
A través de la Red, los investigadores intercambian información y hacen una labor pedagógica sobre la mejor forma de aprovechar los beneficios de la terapia larval, que según Recla, en el mundo presenta tasas de éxito de 80 a 95% en pacientes con heridas que no habían respondido a la terapia convencional y utilizando sólo 3 ó 4 aplicaciones de larvas. |
A cada uno de los animales se les realizó una herida, luego se inoculó en ésta una suspensión de P. aeruginosa y, finalmente, al registrarse el desarrollo de la infección se procedió en los dos primeros grupos a los tratamientos correspondientes. Para la evaluación macroscópica de las heridas, se tuvo en cuenta la presencia de edema y exudado, mal olor, inflamación alrededor de la herida y apariencia del tejido de granulación. Al proceso de cicatrización se le hizo seguimiento a través de técnicas dermohistopatológicas.
Periódicamente, tomaron para los tratamientos de terapia larval grupos de 100 a 200 huevos que fueron recolectados de la cepa Bogotá-Colombia, previamente establecida en el Laboratorio de Entomología de la Universidad del Rosario. Estos huevos los sumergieron en una solución de hipoclorito de sodio al 0.05%, con agitación continua durante 2 minutos, luego los pasaron por formaldehido al 5% durante otro minuto, y finalmente los lavaron con agua destilada estéril por 3 minutos.
Transfirieron los huevos desinfectados a cajas de petri estériles que contenían agar sangre, y en ese momento salieron las larvas previa incubación de los huevos a 27°C. En cada esterilización algunos huevos y larvas, seleccionados al azar, fueron sembrados en caldo soya tripticasa para detectar cualquier indicio de contaminación mediante turbidez.
Las larvas estériles al interior de las cajas de petri, bajo las condiciones señaladas anteriormente, se refrigeraron a 4° C, en algunas ocasiones hasta por 72 horas, antes de ser utilizadas en los tratamientos con los animales.
Antes, durante y después de establecidos los tratamientos, se realizó para cada animal una evaluación de las lesiones tomando como día 0 aquel en que se estableció el tratamiento hasta el día 20 con intervalos de 5 días, para valorar la evolución macroscópica del proceso de cicatrización entre los grupos 1, 2 y 3.